人高迁移率族蛋白B1,高迁移率族蛋白B1Abox和Bbox的原核表达、纯化及高迁移率族蛋白B1多克隆抗血清的制备

摘要：

目的:获取重组人高迁移率族蛋白B1 (HMGBl),HMGBl A box和B box的纯化蛋白,制备HMGBl的多克隆抗血清.方法:采用PCR方法扩增人HMGB1,HMGB1的Abox和B box目的基因片段,构建原核表达载体,进行原核表达与蛋白纯化,然后用HMGB1免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清.采用ELISA检测抗血清效价,用免疫组化检测HMGB1在小鼠肝损伤组织中的表达.结果:成功构建了人HMGB1,HMGB1的Abox和B box原核表达载体pET28-HMGB1、pET28-Abox、pET28-Bbox,在E.coli BL21中表达,镍亲和层析柱提纯,获取纯净目的蛋白.HMGB1免疫新西兰大白兔后,抗血清效价为1∶2,000,000,具有高度特异性.免疫组化显示小鼠坏死肝组织HMGB1表达增加.结论:本研究获得了人HMGB1以及HMGB1的A box和B box的纯化蛋白,制备了人HMGB1的多克隆抗血清,为HMGB1的结构、组织表达谱及其功能的研究奠定了基础.

关键词：HMGB1:A Box、B Box、蛋白表达纯化、多克隆抗血清

所属期刊栏目：11

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4005-4009