人Tim-3基因真核表达载体的构建及表达

摘要：

目的:为了构建可在真核细胞中高效表达人Tim-3 (hTim-3)的真核表达质粒,以便用于hTim-3肿瘤免疫治疗研究.方法:取健康人外周血的单个核细胞,用高保真聚合酶扩增hTim-3基因,先进行hTim-3基因的亚克隆,用Bgl Ⅱ和Sal Ⅰ限制性内切酶切下带有酶切位点的hTim-3基因,最终构建hTim-3基因的真核表达质粒pEGFP-N1 -hTim-3.用脂质体方法转染质粒至肝癌细胞SMMC7721和巨噬细胞U937中.48h后荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光表达情况,初步判断转染效率.结果:酶切和测序鉴定证实目的基因hTim-3正确插入到真核表达载体pEGFP-N1中,转染肝癌细胞SMMC7721和巨噬细胞U937后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:成功构建了可在真核细胞中高效表达hTim-3基因的真核表达质粒pEGFP-N 1-hTim-3,为进一步研究hTim-3的肿瘤免疫治疗奠定了基础.

关键词：Tim-3基因、克隆、表达

所属期刊栏目：11

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

在线出版日期：2011-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：3427-3430