人IL-3基因原核表达载体的构建及表达

摘要：

构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达.方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达.表达产物用SDS-PAGE检测表达情况.结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a-IL-3.SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达.结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达.

关键词：白细胞介素3、造血干细胞、原核表达

所属期刊栏目：11

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

资助基金：国家科技重大专项2009ZX09301-009-BD26;国家自然科学基金面上项目30871090;国家自然科学基金30900496

在线出版日期：2011-12-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2832-2835