慢病毒介导的GFP-Hsp90αE47A基冈在HepG2细胞表达及对细胞增殖性影响的研究

摘要：

目的:建立真核细胞表达的GFP-Hsp90α FA7A基因重组慢病毒栽体三质粒包装细胞系统,并检测其对细胞增殖性的影响,为进一步研究HSP90分子伴侣功能奠定基础.方法:制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(Hsp90αE47A/psin-GFP),包装质粒(△NRF)及包膜蛋白质粒(VSV-G).磷酸钙法将三质粒共转染293T包装细胞,48 h后收集病毒上清.将制备好的慢病毒颗粒感染HepG2细胞,在荧光显微镜下观察报告基因GFP的表达情况,Western blot检测HepG2细胞GFP-Hsp90α表达.MTT法检测细胞增殖情况.结果:转染后的293T和感染后的HepG2细胞能观察到较强的绿色荧光,培养液上清病毒滴度约为3.0× 103ifu/μl,HepG2细胞中有GFP-Hsp90α蛋白的表达.内源性Hsp90α表达无明显上升(为对照组的1.05±0.15倍,P<0.05,t检验),有明显外源性GFP-HspgoaFA7A蛋白的表达,为对照组内源性Hspgoa的0.68±0.12倍.外源性GFP-Hsp90αE47A蛋白的表达HepG2细胞增殖活性于第4d有明显抑制.(1.051±0.03 vs 1.349± 0.05,P<0.05,t检验).结论:成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统,并将GFP-Hsp90αE47A基因在HepG2细胞中稳定表达,且并未引起细胞明显的热休克反应而导致的内源性Hsp90α增高:且能明显抑制细胞增殖,为后期Hsp90α分子伴侣功能进行研究奠定基础.

关键词：热休克蛋白90、ATP酶活性、慢病毒栽体、绿色荧光蛋白

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分类号：Q256;Q75;Q78(细胞生理学)

资助基金：国家自然科学基金305000580;30971193;广东省自然科学基金05300465

在线出版日期：2011-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1643-1646