针对miR-221基因干扰慢病毒载体的构建及其有效靶序列的筛选与检测
目的:构建携带人miR-221基因的miRNA干扰慢病毒载体并寻找其有效靶序列,为胶质瘤的研究提供一种新的方法.方法:合成含干扰序列的双链DNA oligo直接连入酶切后的RNA干扰载体上.将产物转入细菌感受态细胞.对长出的克隆进行PCR鉴定,阳性克隆即为目的基因RNA干扰慢病毒载体质粒.再将目的基因与目的载体分别进行双酶切.纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转入细菌感受态细胞,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确即为融合蛋白过表达质粒栽体,然后将两种质粒共转染入293T细胞,用western bolt法检测其有效敲减靶序列.结果:重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,共转染后发现编号为PscSI576的靶点干扰效果最好.结论:本实验成功构建了人miR-221基因的RNA干扰慢病毒栽体,并找到了有效的干扰靶序列.
RNA干扰、慢病毒、DNA表达载体、miR-221
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S282.71(农田基本建设、农垦)
江苏省医学重点人才基金RC2007029;江苏省社会发展项目BS2007037;淮安市科技发展基金HAS07025;江苏省卫生厅Z200629;江苏省社会发展项目BS2006527;南京医科大学科技发展基金重点项目06NMUZ047;淮安市科技发展基金HAS06040
2011-09-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1625-1630
