AKT2基因短发夹结构RNA慢病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体.方法:利用公用网站按照RNAi序列设计原则,设计RNAi靶点序列并合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经MluI和ClaI进行酶切后的PLVTHM载体连接产生shRNA慢病毒载体.应用 shRNA慢病毒载体转染293T细胞及U87细胞,测定病毒滴度,流式细胞仪测定U87细胞的转染效率,PCR及Western blot 鉴定 AKT2基因在U87细胞中的下调作用.结果:成功构建了shRNA-AKT2慢病毒载体,经测序与设计合成的靶向链完全一致.荧光显微镜下观察293T细胞感染效率大于90%,病毒滴度为3.59x 10<'7>TU/ml;流式细胞仪测定对AKT2细胞的转染效率为86.93%.PCR测定shRNA载体感染U87细胞后AKT2的干扰效率为68%.Western Blot结果显示该慢病毒载体对AKT2的表达有较为显著的敲减作用.结论:成功构建了人胶质瘤细胞株AKT2基因RNAi慢病毒载体,为后续的体内外功能学试验创造了条件.

关键词：丝/苏氨酸蛋白激酶2、RNA干扰、短发夹结构RNA、慢病毒载体

所属期刊栏目：11

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30930094

在线出版日期：2011-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1413-1416