一种基于三顺反子表达载体的生物素诱导表达系统的建立

摘要：

目的:建立一种以无毒的生物素为诱导剂的哺乳动物细胞诱导表达系统.方法:通过基因组PCR或重叠延伸PCR获得该系统的三个基本构件:大肠杆菌生物素连接酶(BirA)、链亲和素-四环素依赖的抑制因子融合蛋白(SA-TetR)和生物素化信号-VP16转录激活结构域融合蛋白(Avitag-VP16).将上述基因连入三顺反子表达载体,与响应载体一起共转染293f细胞,以EGFP为报告基因,检测EGFP荧光强度随培养体系中生物素浓度变化的情况.结果:随着生物素浓度的增加,目的基因表达出现OFF-ON-OFF的变化,诱导状态下的EGFP荧光强度约为抑制状态下的3倍.结论:可通过调节生物素浓度对目的基因的表达进行可逆的调节,该系统是一种有应用前景的诱导表达系统.

关键词：生物素、三顺反子、哺乳动物细胞、诱导表达系统、EGFP

所属期刊栏目：11

分类号：Q813;Q75;Q78(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家"重大新药创制"科技重大专项2009ZX09503-011

在线出版日期：2011-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1404-1408