端粒酶shRNA慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞

摘要：

目的:构建端粒酶shRNA慢病毒载体及建立端粒酶稳定干扰的人类胚胎干细胞系.方法:将端粒酶基因特异性shRNA靶序列与慢病毒载体PLK0.1-puro连接、转化、挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定;利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人类胚胎干细胞,分为干扰组ShTert、载体组vector和野生型组wt;ealtime-PCR检测端粒酶mRNA的表达.结果:经PCR和DNA测序鉴定,成功构建端粒酶特异性shRNA慢病毒载体,并感染人类胚胎干细胞;经检测shTert组端粒酶mRNA表达较vector和wt组明显降低,vector组和wt组之间无明显差异.结论:通过成功构建的端粒酶特异性shRNA慢病毒载体对人类胚胎干细胞的转染实现了对其端粒酶mRNA的调控.

关键词：人类胚胎干细胞、慢病毒载体、转染

所属期刊栏目：11

分类号：Q95-3;Q291;Q75(动物学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2007CB948103;中国高技术发展研究计划863计划2006AA02A102;湖南省科技计划项目2008FJ3133

在线出版日期：2011-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1401-1403