人HCN2真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

摘要：

目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体.并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况.方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长eDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体plRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录.聚合酶链反应检测HCN2 mRNA 表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流.结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA 表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流.结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达.

关键词：HCN4基因、真核表达载体、转染、异源性表达

所属期刊栏目：11

分类号：R54;Q75;Q78(心脏、血管（循环系）疾病)

在线出版日期：2011-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1068-1071