人胱硫醚β合成酶原核表达纯化及鉴定
目的:构建人胱硫醚β合成酶(human cystathionine β-synthase,hCBS)基因原核表达载体,在E.coli BL21(DE3)中表达,并进行纯化和酶活性检测.方法:以胰腺细胞cDNA文库为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增hCBS基因蛋白编码区的全序列,克隆入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-hCBS.经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定目的基因后与人CBS基因(基因bank号:BT007154.1)完全一致,转入E.coli BL21(DE3)中,由IPTG诱导表达融合蛋白.结果:经SDS-PAGE、Western blot分析,证明诱导表达的蛋白为重组人CBS(rhCBS).再由Ni-NTA树脂亲和层析,并脱盐冷冻干燥后获得重组rhCBS(约19mg/L培养物),并测得其比活力约为57kU/g.结论:成功地表达纯化出具有功能活性的重组蛋白rhCBS,为进一步研究该酶的相互作用蛋白以及其在生物学和临床科学的作用奠定了基础.
胱硫醚β合成酶、同型半胱氨酸、酶活力、原核表达、pET32a(+)
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Q75;Q78(分子遗传学)
湖北省自然科学基金2009CDB076;华中科技大学自主创新研究基金2010MS009
2011-07-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
830-833
