大鼠过氧化物酶体增生因子激活受体γ基因慢病毒表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建大鼠过氧化物酶体增生因子激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor gamma)基因慢病毒表达载体,获得可供转染的滴度,为进一步研究该基因在肝星状细胞活化(Hepatic stellate cells,HSC)及肝纤维化中的作用机制提供物质基础.方法:大鼠PPAR-γ基因序列进行PCR扩增,与经AgeI酶切后的pGC-FU-3FLAG载体连接产生慢病毒载体表达质粒pGC-fu-3flag-PPARG,转化DH5α,PCR筛选阳性克隆,测序并转入293T细胞Western blot鉴定,而后将pGC-fu-3flag-PPARG,pHelper 1.0,pHelper2.0三质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒,收集上清浓缩病毒测定病毒滴度.结果:DNA测序及westem blot鉴定证实构建的大鼠PPAR-γ基因慢病毒表达载体pGC-fu-3flag-PPARG正确,浓缩慢病毒悬液的滴度为2× 108TU/ml.结论:成功构建携带大鼠PPAR-γ基因的重组慢病毒表达载体.

关键词：过氧化物酶体增生因子激活受体γ、慢病毒载体、肝纤维化

所属期刊栏目：11

分类号：Q95-3;Q75;Q78(动物学)

在线出版日期：2011-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：259-261