HCV core 1b亚型和HA共表达重组腺病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建HCV core 1b亚型和HA共表达的腺病毒载体并予以鉴定.方法:合成HCV核心蛋白1b亚型的核苷酸,连接入pcmv5-HA质粒中.用Xho Ⅰ单酶切,后用Klenow酶补平,再用HindⅢ单酶切下HA-HCV core 1b片段,连入pShutt1e-cmv穿梭质粒中,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-HA core 1b.将pShuttle-CMV-HA core 1b转化至含有AdEasy-1的BJ5183感受态细菌中进行同源重组.Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒pAd-HA-HCV core 1b并转染AD293细胞进行病毒包装和扩增.用RT-PCR检测HA-HCVcore 1b的mRNA的表达水平,并用Western blot检测融合表达蛋白HA-HCV core 1b的表达水平.结果:穿梭质粒pShuttleCMV-HA-HCV core 1b经PCR和测序证实构建成功.重组腺病毒载体经AD293细胞包装后,可观察到CPE现象.用获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞,经RT-PCR检测,在mRNA水平上有表达;经Western blot检测,HCV core 1b亚型腺病毒载体(Ad-HA-HCV core 1b)感染组与未感染腺病毒载体组及空白对照组相比,只有Ad-HA-HCV core 1b感染组有融合蛋白HA-HCVcore 1b的表达.结论:通过分子克隆体外重组技术,成功构建了HCV core 1b亚型和HA共表达的重组腺病毒载体Ad-HA-HCVcore 1b.为进一步研究丙型肝炎病毒1b亚型引起丙肝感染中胰岛素抵抗的作用机制提供了方法.

关键词：HCV core 1b亚型、重组腺病毒载体、分子克隆

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分类号：R512.63;Q75;Q78(传染病)

资助基金：国家自然科学基金81000171/H0316

在线出版日期：2011-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：8-11