pWPT-GFP慢病毒载体的改构及鉴定

摘要：

目的:为实现慢病毒感染后可用抗生素筛选外源基因稳定整合的细胞,我们对慢病毒载体质粒(pWFF-GFP)进行了改构.方法:将三种抗生素抗性基因(puro、hygro、neo)连同其启动子分别克隆入慢病毒载体(pWPT-GFP).酶切鉴定载体构建正确后,将这三种改构载体分别与辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T包装细胞,收获病毒上清并感染靶细胞,使用相应抗生素筛选细胞验证抗性基因的插入.结果:成功构建了重组慢病毒栽体pWPT-GFP-puro、pWPT-GFP-hygro、pWPT-GFP-neo,通过调整病毒上清的用量可以达到靶细胞100%的感染效率;用相应抗生素筛选细胞证明了抗性基因的表达.结论:我们成功改构了慢病毒载体(pWPT-GFP),从而使病毒感染后用抗生素筛选稳定整合的细胞成为可能.

关键词：慢病毒载体、改构、抗生素筛选

所属期刊栏目：10

分类号：Q75;Q78;R373(分子遗传学)

在线出版日期：2010-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：447-449