携带HSV-1TK基因的逆转录病毒载体构建及在HeLa细胞中的表达
目的:构建携带单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究.方法:用限制性内切酶从质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-TK切下HSV-1TK cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pLXSN得到重组质粒pLXSN-TK,鉴定正确的阳性重组质粒经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定.然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa.PCR、RT-PCR和Western blotting方法检测HSV-1TK基因在HeLa中的整合和表达情况.结果:重组质粒pLXSN-TK经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现HSV-1TK基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录和翻译.结论:成功构建了逆转录病毒pLXSN-TK,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的治疗基因HSV-1TK在细胞中表达,为今后HSV-1TK基因治疗宫颈癌的研究奠定基础.
单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因、逆转录病毒、宫颈癌
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R-332;R322.61(医学研究方法)
教育部中国博士后科学基金20080440778;深港创新圈计划08fz-11
2010-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
205-207
