猪链球菌2型ABC转运蛋白gene0910敲除突变体的构建及活性分析

摘要：

目的:构建猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)强毒株05ZYH33 89 K毒力岛上的ABC转运蛋白gene0910敲除突变体,并初步分析其活性,为进一步研究猪链球菌假想毒力因子在致病中的作用提供实验基础.方法:以猪链球菌2型05ZYH33基因组为模板,扩增gene10910两侧各约500 bp左右的片段为上下游同源臂,以psET1质粒为模板,扩增氯霉素抗性基因Cm为中间片段,采用重叠PCR方法搭建三个片段,并克隆到自杀载体pSET4S上,构建基因敲除的载体.电转化05ZYH33感受态细胞,经30℃双交换和40℃质粒丢失,最后点板法筛选出基因敲除突变体△0910.对突变株和野生株的生物学活性及小鼠的致病性进行了初步比较.结果:PCR分析和测序结果均显示gcne0910完全被氯霉素抗性基因Cm所替代,基因敲除突变体构建成功.结论:突变株的生物学活性和对小鼠的致病性与野生株相比差异不显著.

关键词：猪链球菌2型、89K毒力岛、ABC转运蛋白、基因敲除

所属期刊栏目：10

分类号：Q939.93(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30870091;30770117;30600023

在线出版日期：2010-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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