犬瘟热病毒H基因原核表达载体的构建

摘要：

利用本实验以前构建的含有犬瘟热病毒H基因的pMD18-T质粒,根据pMD18-T-H序列设计带有Xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的引物,对H基因进行PCR扩增,得到约1800bp左右的片段.该片段被克隆到pMD18-Tsimple载体上,用Xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行单、双酶切鉴定,筛选阳性克隆.将阳性克隆再用Xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行双酶切,纯化回收CDVH基因片段.将原核表达载体pPROEXTMHTa、pet-30b用同样的方法酶切,回收载体片段.将CDV H基因片段分别用T4连接酶连接到回收的pPROEXTMHTa、pet-30b载体上,构建原核表达载体质粒pPROEXTMHTa-H和pet-30b-H.再用Xba1 Ⅰ和Hind Ⅲ进行单、双酶切鉴定阳性载体.本实验为下一步H蛋白表达、纯化并作为CDV诊断用抗原及CD的免疫预防奠定了基础.

关键词：犬瘟热病毒、H基因、表达载体、构建

所属期刊栏目：8

分类号：Q78;Q813(基因工程（遗传工程）)

资助基金：黑龙江省科技厅攻关基金GB02BS06;国家林业局科技课题野生动物主要疫病检测方法和诊断平台的建立资助项目

在线出版日期：2009-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1849-1851