豌豆过氧化氢酶在烟草叶绿体中的过量表达提高了植物的抗逆性
通过构建融合番茄RuBP羧化酶小亚基转运肽基因(rbcS-3)和CAT基因编码阅读框(ORF)的双元表达载体,采用农杆菌介导的叶圆盘转化法将融合基因转入烟草,使其能够定向导入叶绿体中发挥作用.在含有50mg/L潮霉素的培养基上筛选获得转CAT烟草30多个株系,并对其进行了分子生物学的验证和生理指标的检测.对获得的抗性植株用PCR、RT-PCR、植株总蛋白western blot和叶绿体蛋白Western blot分析表明,目的基因已经整合到烟草基因组中,并能正常表达,且在叶绿体rbcS-3转运肽的作用下能定向进入叶绿体中.对转基因植株生理指标的检测发现,在20%PEG6000 模拟干旱条件下,野生型烟草的相对电导率提高幅度为43.4%,而转CAT植株的相对电导率仅提高8.8%,表明在干旱胁迫下转CAT烟草的质膜透性小于野生型烟草;经20%PEG6000处理后,野生型和转CAT基因烟草的叶绿素含量都下降,下降幅度分别为68.0%和20.4%;另外,经20%PEG6000处理的野生型烟草叶片的Fv/Fm下降幅度为5.3%,而转CAT基因烟草叶片的Fv/Fm下降幅度0.9%,这些结果表明,在叶绿体中过量表达CAT对干旱胁迫下的细胞质膜、叶绿素和PSⅡ具有一定的保护作用.此外,经150μmoL/L百草枯处理后发现,处理3h后,野生型烟草和转CAT烟草的相对电导率分别比对照提高67.9%和13.5%,而野生型和转CAT烟草的Fv/Fm都下降,降幅分别为23.7%和3.9%,这表明在百草枯氧化胁迫下转CAT烟草的质膜和PSⅡ的损伤程度都小于野生型烟草.总之,豌豆CAT 基因在烟草叶绿体中过量表达,提高了转基因烟草的抗旱性和抗氧化性.
烟草、豌豆过氧化氢酶基因、抗逆性
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S57;S43
国家自然科学基金项目30170556,30970240;山东省自然科学基金项目2009ZRB019E7;植物生理生化国家重点实验室开放课题PPB08005;青岛农业大学高层次人才基金630743
2015-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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