中华绒螯蟹甲壳肽EsCrus3和EsCrus4表达模式与免疫功能

摘要：

研究从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中克隆并鉴定了两个Ⅰ型甲壳肽(Crustin)基因,分别命名为EsCrus3和EsCrus4.随后通过生物信息学、基因表达分析、蛋白表达与纯化、免疫功能验证等研究手段,分析了这2个新型抗菌肽的表达、结构和功能.EsCrus3的cDNA序列全长567 bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为351 bp,编码116个氨基酸(Amino acid,aa);EsCrus4序列全长743 bp,ORF区288 bp,编码95个aa.两者都含有信号肽、富半胱氨酸的结构域(Cysteine-rich region,CRR)和WAP(Whey acidic protein)结构域.EsCrus3和Es Crus4氨基酸序列的一致性仅为30.77%,并且进化分析显示Es Crus3和Es Crus4分别位于两个具有分类意义的分支上,提示两者生物学功能可能存在差异.EsCrus3和EsCrus4均在卵巢中高度表达且具有相似的表达水平,在金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激时呈上调表达趋势,其中EsCrus3响应速度更快,在刺激2h时上调表达,EsCrus4则在刺激后12-24h时显著上调.重组蛋白Es Crus3和Es Crus4对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均具有不同程度的结合活性,并且对不同微生物多糖结合活性也存在明显差异.Es Crus3对革兰氏阳性菌的肽聚糖(PGN)和脂磷壁酸(LTA)具有很高结合活性,对革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)和真菌β-葡聚糖也有一定结合活性,而Es Crus4只对PGN具有显著结合活性.上述研究结果表明EsCrus3响应病原刺激更迅速、与病原多糖结合能力更强,提示其在卵巢的免疫防御体系中发挥更重要作用.此外,EsCrus3和EsCrus4序列和功能的差异为新型药物的挖掘提供了基础数据.

关键词：抗菌肽、Ⅰ型Crustin、表达分析、结合活性、中华绒螯蟹

所属期刊栏目：47

分类号：Q344+.1(遗传学分支学科)

在线出版日期：2023-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1838-1848