抗菌肽Hepcidin诱导草鱼肾细胞miRNA表达分析

摘要：

为探讨草鱼抗菌肽Hepcidin(CiHep)过表达前后草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idella kidney,CIK)miRNA表达谱变化及其分子机制,将构建的重组表达质粒pmCherry-N1-Cihep转染CIK细胞,通过检测CiHep基因转录水平及融合蛋白mCherry-CiHep荧光强度,筛选其最佳过表达时间.在最佳过表达时间点收集CIK细胞样本,进一步利用高通量测序和qPCR技术对差异表达miRNA表达谱进行分析.结果显示,CiHep基因在CIK细胞中最佳过表达时间为转染后72h.从构建的2个sRNA文库中分别鉴定到1850与2013种已知miRNAs,并发现1266与1347种新miRNAs.与对照组相比,过表达组共筛选到460个DEmiRNAs,其中392个显著上调,68个显著下调.对5150个DEmiRNA靶基因进行GO注释和KEGG通路分析,发现436个靶基因得到GO注释,主要参与细胞进程、生物学调节和单细胞生物进程等生物学过程;157个靶基因富集于54条KEGG通路.miRNA-mRNA-免疫互作网络分析显示,29条DEmiRNA和23个靶基因潜在介导CiHep参与C型凝集素受体、PI3K-Akt、NOD样受体等13个免疫相关信号通路.12个DEmiRNAs的qPCR验证结果与高通量测序结果一致.研究解析了CiHep过表达前后CIK细胞miRNA差异表达谱特征,明晰pma-miR-199b-5p、dre-miR-15a-5p、novel_miR_317和novel_miR_536在免疫调控网络中发挥重要作用,为深入探究鱼类抗菌肽诱导miRNA免疫调节的分子机制奠定了基础.

关键词：铁调素、过表达、草鱼肾细胞系、miRNA、差异表达谱

所属期刊栏目：47

分类号：S942.1(水产保护学)

在线出版日期：2023-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1827-1837