虹鳟spindlin基因克隆及不同倍性的表达分析

摘要：

spindlin基因是减数分裂纺锤体相关因子,为了研究spindlin基因在二倍体和三倍体雌性虹鳟减数分裂过程中出现的差异,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得spindlin基因cDNA 4529 bp(GenBank登录号:MN378564),其中3′非编码区(UTR)和5′非编码区(UTR)分别长3662 bp和141 bp,开放阅读框(ORF)长726 bp,编码241个氨基酸,该蛋白质序列的相对分子量为28.3 kD,理论等电点值为5.94,无跨膜结构.同源性分析表明,虹鳟(Oncorhynchus mykiss)与银大马哈鱼(Oncorhynchus kisutch)同源最高,高达99.59％.系统发育进化树显示,虹鳟与大鳞大马哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha)和红点鲑(Salvelinus alpinus),聚为一支.实时荧光定量(RT-PCR)结果显示,spindlin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢、肾、肝、脾、肌、鳃、心、眼、肠和鳍组织中均有表达,其中,在卵巢中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01).对于二倍体雌性虹鳟,在受精后240—300d(days post fertilization,dpf)发育阶段,spindlin基因在卵巢组织中的相对表达量显著下降.对于三倍体雌性虹鳟,该基因在240—330 dpf阶段的表达量显著上升.在同一发育阶段中,spindlin基因在二倍体雌性虹鳟卵巢中的表达量较三倍体雌性虹鳟相对较高,且均存在极显著差异(P<0.01).通过免疫组化结果发现,二倍体雌性虹鳟在240 dpf阶段,Spin蛋白在初级卵母细胞核内信号最强,在270—330 dpf阶段逐渐减弱;三倍体虹鳟卵巢在240—330 dpf发育阶段,在卵原细胞中信号逐渐增强.减数分裂异常是性腺败育的关键原因,研究结果表明三倍体虹鳟在减数分裂过程中出现异常与spindlin基因的低表达有关,这可能是卵巢发育阻滞的原因之一.

关键词：虹鳟、spindlin、基因克隆、基因表达、免疫组化

所属期刊栏目：45

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国水产科学研究院科研业务费项目;现代农业产业技术体系专项资金

在线出版日期：2021-01-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：14-21