中华鲟Vtg间接竞争ELISA检测方法的建立和应用

摘要：

卵黄蛋白原(Vitellogenin, Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物, 通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术.首先通过RACE-PCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 kD.构建Vtg功能区段融合原核表达载体pET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白, 并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清, Western blotting检测显示抗血清的特异性较好.以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原, 中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体, 建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA), 标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794, 相关系数R2为0.9976.该方法检测的灵敏度为4.12 μg/mL, 最低检测限为0.3 μg/mL, 批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%.通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测, 表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测.

关键词：中华鲟、卵黄蛋白原、ELISA、抗血清

所属期刊栏目：42

分类号：Q-31(生物科学的研究方法与技术)

资助基金：中国水产科学研究院基本科研业务费2017JBF0102;国家重点基础研究发展计划973计划, 2015CB150702 资助 [Supported by the Central Public-interest Scientific Institution Basal Research Fund2017JBF0102;the National Key Basic Research Program of China 973 Program, 2015CB150702]

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：779-785