半滑舌鳎外周血T淋巴细胞的分离、鉴定及TCRβ基因免疫应答分析

摘要：

为开展半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)免疫学研究提供细胞平台, 利用密度梯度离心法分离半滑舌鳎外周血淋巴细胞, 采用短期细胞培养法分离悬浮淋巴细胞, 悬浮淋巴细胞在含有0.3 μg/mL的PHA的DMEM完全培养基, 于24℃条件下可连续培养3—4d左右, 采用自制的尼龙毛柱可将悬浮淋巴细胞中的非黏附淋巴细胞和黏附淋巴细胞成功分离; 利用流式细胞仪结合特异抗体检测对非黏附淋巴细胞和黏附淋巴细胞进行鉴定,结果表明, 非黏附细胞与鼠抗人FTIC-CD3单克隆抗体特异结合, 为T样淋巴细胞; 黏附细胞和鼠抗人FTIC-CD19单抗特异结合,为B样淋巴细胞.T细胞表面抗原受体TCRβ基因可特异性的在非黏膜细胞中表达,而在黏附细胞中不表达, 证明分离获得的非黏膜细胞为T淋巴细胞, 采用qRT-PCR (Quantitative Real-Time PCR)方法检测TCRβ基因表达, 结果表明, TCRβ基因在半滑舌鳎肝、脾、头肾、后肾、小肠、胃、血液、鳃、皮肤、肌肉、心脏、脑、卵巢组织中均有表达, 其中在肠、胃、脾、头肾中表达量较高; 鳗弧菌感染后TCRβ基因在肝、脾、鳃中呈现明显的上调表达,且表达峰值出现在感染后72—96h,表明TCRβ基因在获得性免疫应答中起重要作用.

关键词：半滑舌鳎、T淋巴细胞、B淋巴细胞、外周血、TCRβ基因、免疫应答

所属期刊栏目：42

分类号：S942.1(水产保护学)

资助基金：国家自然科学基金31572644;青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室开放基金2016LMFS-A25资助[Supported by the National Natural Science Foundation of China31572644;Laboratory for Marine Fisheries Science and Food Production Processes,Qingdao National Laboratory for Marine Science and Technology2016LMFS-A25]

在线出版日期：2018-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：480-487