红星梭子蟹变应原原肌球蛋白基因的克隆、表达及其免疫学鉴定
克隆、表达红星梭子蟹蟹肉中变应原原肌球蛋白(Tropomyosin),并对其免疫学特性进行鉴定.RT-PCR克隆红星梭子蟹(Ponunus sanguinolentus)蟹肉中变应原原肌球蛋白的全长基因,根据序列设计带有酶切位点的特异性引物,扩增蟹Tropomyosin的完整开放阅读框,与pET-28a载体连接并转化大肠杆菌Escherichia.coli BL21(DE3),诱导表达后,N不i2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western-blot检测其免疫学活性,胰酶消化后进行MALDI-TOF-MS质谱分析鉴定.克隆所得蟹Tropomyosin基因包括一个编码285个氨基酸的开放阅读框.序列分析结果显示所克隆得到的基因与已知虾、螨、蟑螂等的Tropomyosin变应原基因有较高的同源性(＞80%).根据变应原的命名规则,将其命名为Pors 1,并提交GenBank数据库,登录号为EF143836.重组蟹Tropomyosin在大肠杆菌中能高效的表达,表达产物经Ni2+亲和层析柱纯化后进行Western-blot检测,结果显示该重组蛋白具有良好的免疫学活性,MALDI-TOF-MS质谱分析进一步证实了该重组变应原的正确性.本研究成功克隆和表达了红星梭子蟹变应原Tropomyosin,为蟹过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础.
红星梭子蟹、变应原、原肌球蛋白、基因克隆、表达、MALDI-TOF-MS质谱
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Q344+.1(遗传学分支学科)
广东省科技重点专项2003A3080502;深圳市科技计划200326
2009-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
296-303
