10.19790/j.cnki.JCM.2022.04.02
土荆皮乙酸对A549细胞迁移侵袭及EMT影响探讨
目的 探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮间质转化(EMT)的影响以及与其迁移侵袭的关系,以期找到该单体抗肺癌的作用机制,或为临床肺癌治疗新方案提供实验依据.方法 应用CCK8法检测不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)PAB对人肺癌A549细胞增殖的影响,分别干预(0、12、24、36、48 h)确定最佳作用浓度及最佳作用时间.将A549细胞分组:对照组(添加培养基)、诱导组(添加5μg/L TGF-β1)、实验组(最佳浓度PAB+5μg/L TGF-β1).Transwell小室实验检测PAB对肺癌A549细胞迁移、侵袭力的影响.采用免疫印迹法、细胞免疫荧光法以及实时定量PCR法检测EMT相关分子标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达和mRNA水平.采用SPSS 16.0对实验数据进行统计学分析,GraphPad PHsm 6.0作图软件制图,应用单因素方差分析法进行多组数据比较.结果 CCK-8结果显示,不同浓度PAB对人肺癌细胞A549均具有增殖抑制作用,且抑制细胞增殖具有时间和浓度依赖性.当PAB浓度40μmol/L时对肺癌A549细胞具有明显增殖抑制作用,达到肿瘤半数抑制率,且细胞毒性较低,因而选用该浓度作用48 h作为后续实验的最佳作用浓度及时间.蛋白质印迹法检测结果显示,PAB能下调N-Ca的表达,差异有统计学意义.对照组肺癌A549细胞N-Ca蛋白量为1.080±0.015,诱导组为2.777±0.018,实验组为1.807±0.032,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-13.863,P=0.001;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-6.853,P=0.002;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=-6.183,P=0.009.RT-PCR显示结果,PAB能增加E-Ca的表达而下调N-Ca的表达,差异有统计学意义.对照组肺癌A549细胞E-Ca蛋白量为1.000±0.001,诱导组为0.477±0.007,实验组为0.847±0.012,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=21.772,P=0.002;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=2.484,P=0.048;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=-10.566,P=0.002.对照组肺癌A549细胞N-Ca蛋白量为1.000±0.001,诱导组为3.273±0.022,实验组为1.613±0.003,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-24.690,P=0.002;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-6.635,P=0.003;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=9.878,P=0.002.上述结果说明与对照组相比,诱导组的肺癌A549细胞上皮标记蛋白E-ca表达下降而间质标记蛋白N-ca表达增强,同时迁移和侵袭能力也增强.与诱导组对比,实验组的肺癌A549细胞经过PAB干预后相关上皮性标记蛋白E-ca表达增加,间质标记蛋白N-ca表达下降,且迁移和侵袭能力也明显减弱.结论 40μmol/L PAB作用48 h可以抑制TGF-β1介导的肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,这可能与抑制TGF-β1介导的肺癌A549细胞EMT的过程有关.
中药抗肿瘤、上皮间质转化、转移、土荆皮乙酸
20
R285.5(中药学)
2022-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
186-192
