CBHⅡ和EGⅣ的重构基因在里氏木霉中的组成型表达

摘要：

重构基因cbh2-linker-CDeg4表达的融合蛋白同时获得具有外切葡聚糖酶CBH II和内切葡聚糖酶EG IV 2种催化活性，在纤维素降解等方面有着重要应用。本研究通过overlap PCR将里氏木霉丙酮酸脱羧酶（PDC）的启动子、纤维二糖水解酶cbh1的信号肽、重构基因cbh2-linker-CDeg4和pdc终止子依次连接，以质粒pPICZαA为基本骨架，构建表达载体pPIC-PCT。采用原生质体转化法将pPIC-PCT和含潮霉素抗性筛选标记的质粒pAN7-1共转里氏木霉。SDS-PAGE分析表明，重构基因cbh2-linker-CDeg4实现了在里氏木霉中的组成型表达，测得重组木霉发酵上清液的CMCNa酶活最高达到4.08 U/mL，是出发菌株的5.55倍，FPA酶活达到0.915 U/mL，较出发菌株提高了43.6%。酶学性质初步研究表明：粗酶液的最适pH为5.0，最适温度为50℃。

关键词：基因重构、外切葡聚糖酶Ⅱ、内切葡聚糖酶Ⅳ、丙酮酸脱羧酶启动子

分类号：X38;TH1

资助基金：深圳市基础研究计划JCYJ20120613115323982

在线出版日期：2015-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：114-117,138