KlacPNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达

摘要：

嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险.为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的 目的PNP基因连接至分泌表达载体pB-SA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43.结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL.为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃.在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了 12％.来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础.

关键词：嘌呤核苷磷酸化酶、枯草芽胞杆菌、密码子优化、异源表达、响应面分析

所属期刊栏目：49

分类号：Q939.9;TQ92;Q556

资助基金：中国博士后科学基金2019M651149

在线出版日期：2023-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：53-59