分子改造羰基还原酶CpCR提高其催化合成2-苯乙醇能力

摘要：

该研究对近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR进行分子改造,以提高其催化合成2-苯乙醇的能力.通过易错PCR构建突变文库,利用2,4-二硝基苯肼高通量筛选阳性突变株,测序确定氨基酸突变位点.再通过蛋白质半理性设计进行虚拟饱和突变,采用定点突变技术进行构建和评价.筛选获得突变体T171F具有更强的催化能力和热稳定性.进一步考察了催化时间、温度、pH值和底物浓度对wtCpCR和T171F催化合成2-苯乙醇的影响.研究表明,酶最适催化合成2-苯乙醇的温度为30℃;T171F最适催化合成2-苯乙醇的pH为6.5;苯乙醛的质量浓度为1 000 mg/L时T171F产率可达91.24％,是wtCpCR的2.8倍.此外,突变体T171F相比wtCpCR催化时间由10 h降低到4 h,催化效率得到很大的提高.该研究为羰基还原酶催化合成2-苯乙醇提供科学基础,同时具有一定的应用价值.

关键词：羰基还原酶、易错PCR、2、4-二硝基苯肼、半理性设计、2-苯乙醇

所属期刊栏目：49

分类号：O643;Q554;TQ426.97

资助基金：国家自然科学基金;湖北省技术创新专项

在线出版日期：2023-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：30-37