纤维素堆囊菌源果糖激酶的克隆表达及其酶学性质研究

摘要：

为促进果糖-6-磷酸的绿色生物制备,该研究对纤维素堆囊菌(Sorangium cellulosum)中的果糖激酶基因进行克隆、表达,探究重组酶酶学性质和底物特异性.以纤维素堆囊菌基因组 DNA 为模板,设计引物克隆果糖激酶基因 SoCeFruK1852 和 SoCeFruK7579,构建重组表达质粒 pET30a-SoCeFruK1852 和 pET30a-SoCeFruK7579,并在 Escherichia coli(DE3)中诱导表达,纯化重组果糖激酶,研究反应产物和酶学性质.重组果糖激酶 SoCe-FruK1852 和 SoCeFruK7579 的分子质量大小分别为 31.2、32.8 kDa,蛋白质质量浓度为 2.04、1.8 mg/mL,比活力分别为 35.8、18.3 U/mg.SoCeFruK1852 的最适温度和 pH分别为 37℃和 4.5.金属离子 Co2+、Fe3+、Zn2+和化学试剂 SDS、EDTA、Tween 20 对酶活力有抑制作用,而 Mg2+和 Mn2+对酶活力有促进作用.以果糖为底物时,SoCeFruK1852 的 Km值为 0.54 mmol/L,Vmax值为 1.28 μmol/s.SoCeFruK1852 能够特异性催化果糖,但也能催化部分 D-塔格糖.获得细菌来源的重组果糖激酶 SoCeFruK1852 和 SoCeFruK7579,且 SoCeFruK1852 显示良好的酶活力和酶学性质,底物特异性较强,为后续相关研究奠定基础.

关键词：纤维素堆囊菌、果糖激酶、基因克隆、异源表达、酶学性质

所属期刊栏目：49

分类号：Q785;O652;Q55

资助基金：盐城工学院校级科研项目xjr2021027

在线出版日期：2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：221-228