Candida glycerinogenes基因组大片段缺失菌的构建及表征

摘要：

通过基因组精简可获得代谢背景降低、更适用于工业生物技术的底盘细胞.产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)是具有优良抗逆性能的工业菌株,对其基因组进行精简以获得更优的底盘化细胞.以CRISPR/Cas9为工具进行C.glycerinogenes基因组非必需DNA大片段删除,实现了25、50 kb片段的敲除,并研究了缺失菌的耐受性和发酵特性.结果显示,片段删除菌株的胁迫耐受能力无明显改变,30℃下Δ7.8 kb菌生物量降低20％,42℃下Δ7.8 kb、Δ25 kb菌的生物量下降20％.而在发酵过程中各缺失菌均表现出生物量降低20％,其中Δ7.8 kb菌株表现出了发酵初生物量提高了14％、单位菌体甘油产量提高了22％,还原力相关基因G6PD、6PGDH分别上调10倍和29倍,NADPH/NADP+值提高了100％.结果表明,上述非必需DNA大片段删除对C.glycerinogenes耐受特性无明显影响,而会导致生物量降低和单位菌体甘油产量提高,缺失菌株可能因基因表达水平的差异而与野生菌株在性状上产生区别.该研究是对CRISPR/Cas9系统在C.glycerinogenes中的潜力挖掘,有助于推进该非模式工业菌株底盘化进程和应用.

关键词：基因组精简、底盘细胞、产甘油假丝酵母、CRISPR/Cas9、基因组大片段编辑、生理表征

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65;S718.46;R734.2

资助基金：国家自然科学基金31970033

在线出版日期：2023-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1-8