交替糖蔗糖酶在毕赤酵母中的重组表达、酶学性质及转化反应研究

摘要：

交替糖作为一种新型功能性低聚糖具有良好的益生作用.交替糖在自然界中的含量较少,主要通过发酵法和酶法制备,但目前交替糖蔗糖酶(alternansucrase,ASR)活性较低成为制约交替糖应用的主要因素.为促进交替糖的应用,该研究合成了密码子优化后的交替糖蔗糖酶基因,将其首次在毕赤酵母GS115中成功重组表达.3 L发酵罐高密度发酵72 h结果显示,重组菌发酵上清液中ASR酶活力为34.5 U/mL,约是摇瓶水平的12倍,也是目前重组ASR的最高表达水平.酶学性质研究表明,重组ASR的最适pH和最适温度分别是pH 6.0和55℃,Km和kcat分别是31.97 mmol/L,0.36 s-1.以蔗糖、蔗糖和麦芽糖等其他小分子糖为底物,在40℃,pH 5.5条件下利用重组ASR制备交替糖.将催化产物经薄层色谱初步分析,鉴定得出催化产物中生成了大量交替糖寡糖和交替糖多糖.该研究首次实现了交替糖蔗糖酶基因在毕赤酵母中高水平重组表达,并催化制备了交替糖,为ASR的异源表达及规模化制备交替糖提供了良好基础.

关键词：交替糖蔗糖酶、毕赤酵母、异源表达、高密度发酵、催化反应、交替糖

所属期刊栏目：48

分类号：O643.32;Q78;TS201.3

资助基金：国家轻工业技术与工程一流学科计划项目LITE2018-04

在线出版日期：2022-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：29-34