采用组合策略提高灰色链霉菌胰蛋白酶在毕赤酵母中的表达

摘要：

胰蛋白酶是一种重要的工业酶,广泛应用于皮革加工、食品加工和医药等领域.该研究从菌株改造及发酵条件优化两方面提高了灰色链霉菌胰蛋白酶(Streptomyces griseus trypsin,SGT)在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的发酵产量.首先,分析了4种分子伴侣(Cne1、Bmh2、Ssa4和Vhb)和2种转录因子(Yap1、Aft1)对SGT在P.pastoris GS115中表达的影响.摇瓶发酵结果显示,与转录因子Aft1共表达时SGT酶活力较对照菌提高了19.71％,达到217.30 U/mL;其他转录因子或分子伴侣的共表达降低了SGT产量.其次,确定了菌株PP-SGTm/Aft1的最适生长pH和最适诱导pH分别为5.5和6.5.最后,优化了PP-SGTm/Aft1在5 L罐中诱导产酶过程中流加混合碳源(甲醇-山梨醇)的比例.结果显示,当补加的m(甲醇):m(山梨醇)=20:0.5时,5 L罐SGT酶活力达到了2667.24 U/mL(144 h),较仅流加甲醇酶活力提高了20.1％.研究结果将为SGT工业化发酵生产提供重要基础数据.

关键词：胰蛋白酶;毕赤酵母;分子伴侣;转录因子;发酵优化;混合碳源

所属期刊栏目：47

资助基金：国家重点研发计划项目;国家自然基金面上项目

在线出版日期：2021-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：15-21