屎肠球菌源谷氨酸脱羧酶的制备及其酶学性质研究

摘要：

为了开发谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD),以Enterococcus faecium为gadB基因供体、纤维素结合域(cellulose-binding domain,CBD)为亲和标签,利用内含肽DnaB自剪切作用分离GAD,对融合酶CBD-DnaB-GAD的构建、表达、GAD纯化及其酶学性质进行了探讨.结果表明:重组Escherichia coli GDMCC60446可高效表达CBD-DnaB-GAD,适宜自剪切液为0.2 mol/L Na2 HPO4-NaH2 PO4缓冲液(pH 6.5,含NaCl 0.5 mol/L、EDTA 1 mmol/L);经一步纯化和自剪切制备的GAD在SDS-PAGE电泳上呈单一条带,分子质量约为55.68 kDa,仅有1个亚基;GAD最适反应pH和温度分别为5.0和55℃,在pH 4.8～5.8和-25～55℃较稳定;5 mmol/L的NaCl、CaCl2和乙二醇对GAD酶活力影响不大,而KCl、EDTA-2Na、ZnSO4、CuSO4、MnSO4、MgSO4、FeCl2、FeCl3、AlCl3、AgNO3和Pb(CH3 COO)2对GAD酶活力具有不同程度的抑制作用;GAD仅催化L-谷氨酸发生脱羧反应,Km和Vmax分别为10.51 mmol/L和3.41μmol/(mL·min),催化反应无底物和产物抑制作用.GAD纯度和酶学性质优良,制备工艺简便,该技术有望应用于工业化生产.

关键词：屎肠球菌、谷氨酸脱羧酶、纤维素结合域、内含肽、酶学性质

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资助基金：农业农村部水产品加工重点实验室开放基金项目;广东省自然科学基金项目;岭南师范学院科研专项

在线出版日期：2021-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：28-34