环磷酸腺苷生产酵母菌株不同阶段RNA的提取改进

摘要：

考察了环磷酸腺苷(cyclic adenosine monphosphate,cAMP)生产酵母菌株G2在YPD培养基中不同生长阶段的总RNA提取效果,并进行了初步改进研究.选择16 h对数生长期、36 h二次生长期和60 h稳定期细胞,分别用试剂盒提取,RNA得率依次为1010.6、171.5和91.3 ng/A600.选择高、低丰度表达基因ACT1和CYR1进行实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR),同时判断DNA污染情况;琼脂糖电泳和RNA完整值(RNA integrity number,RIN)测定判断完整性.结果显示,36 h和60 h RNA提取物都存在DNA污染,仅16 h样品能满足RNA测序要求.进一步对比了5种破壁方法在破碎细胞及相应RNA提取上的效果,添加珠打破壁步骤破碎细胞效果最好,显示对16 h细胞RNA提取效果没有明显变化,但36 h和60 h细胞的RNA得率分别提高至979.6和785.6 ng/A600,为前述值的5.71倍和8.60倍,且纯度能满足qRT-PCR要求,36 h样品能满足RNA测序要求.该研究有助于推动建立酵母生长全阶段RNA分析技术和深化cAMP相关途径调控机制的认识.

关键词：酵母、生长阶段、RNA提取、珠打

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资助基金：国家自然科学基金;国家高技术研究发展计划;天津市科委基金

在线出版日期：2021-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

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