重组大肠杆菌产乙酰乳酸合成酶发酵条件优化

摘要：

为了提高来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的乙酰乳酸合成酶(acetolactate synthetase,ALS)的产酶水平,将含有目的基因的重组质粒pEGX-6p-1-als S,转化到E.coli BL21(DE3)进行异源表达,并对重组alsS的发酵条件进行优化.发酵结果显示,优化的发酵培养基成分包括葡萄糖12 g/L、蛋白胨10 g/L、柠檬酸钠5 g/L、KH2 PO43 g/L、MgSO4·7H2 O 1 g/L和NaCl 2 g/L;在优化的培养基中,最佳诱导条件为诱导温度30℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度0.4 mmol/L,诱导时间10 h.通过响应面预测发现,最佳产酶水平条件为pH 7.0、温度30.2℃,IPTG浓度为0.42 mmol/L.经发酵试验验证,该条件下产酶水平达到242.567 U/mL.基于以上所有优化条件,单位菌体(干重)产乙酰乳酸合成酶量达164.299 kU/g,产酶水平达266.657 U/mL,分别是LB培养基的1.31和1.77倍.

关键词：双乙酰、乙酰乳酸合成酶、大肠杆菌、响应面

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资助基金：四川省科技厅重点研发项目;四川大学-五粮液博士后联合培养项目;酿酒生物技术及应用四川省重点实验室项目;四川理工学院四川省院士专家工作站重点项目;四川理工学院人才引进项目

在线出版日期：2020-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：156-162