Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达及活性研究

摘要：

研究了Lg-Flo1蛋白N端的诱导表达条件及与甘露糖的结合活性.将构建的巴氏酵母Lg-FLO1基因N端序列的重组表达载体pETFL1进行双酶切验证,转化大肠杆菌BL21(DE3),通过菌落PCR鉴定阳性转化子,并进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测不同诱导条件对目的蛋白N-Lg-Flo1表达的影响,并对目的蛋白进行变性溶解、纯化、复性及活性测定.结果表明,酶切证实重组表达载体含有N-Lg-FLO1基因片段;在LB培养基中的表达量高于TB培养基;和IPTG相比,乳糖诱导同样可以表达含量较高的目的蛋白且成本较低.以乳糖作为诱导剂,终质量浓度为0.2 g/L,诱导温度37℃,诱导6 h,目的蛋白的表达量均高于30％;荧光光谱分析表明,复性后的N-Lg-Flo1蛋白具有与甘露糖结合的活性.该研究为大规模生产絮凝蛋白并以此为原料制备糖的特异性吸附剂奠定了基础.

关键词：N-Lg-Flo1蛋白、诱导表达、乳糖、甘露糖结合、絮凝

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资助基金：国家自然科学基金项目31871785;江苏省重点研发计划现代农业面上项目BE2018345;中央高校基本科研业务费专项资金JUSRP21914;高等学校学科创新引智计划111计划项目111-206

在线出版日期：2019-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：9-14