褐色嗜热裂孢菌脱色过氧化物酶的表达及发酵条件优化

摘要：

为了提高来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脱色过氧化物酶(Tfu DyP)对蒽醌染料降解能力,将含有目的基因的重组质粒pET-28a(+)-TfuDyP,转化至E.coli BL21进行异源表达,并对重组TfuDyP的发酵条件进行优化,分析酶活与血红素饱和度之间的关系.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测到分子质量为46 kDa的重组TfuDyP蛋白条带.TfuDyP的最佳诱导条件为:诱导剂(IPTG)浓度0.3 mmol/L,诱导时间14 h,诱导温度30℃,在此条件下,TfuDyP比酶活达到27.9 U/g.氯高铁血红素、5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)、谷氨酸(Glu)、FeCl2、MnCl2均可提高重组TfuDyP的催化活性,酶活的提高与血红素饱和度之间存在一定的正相关性.实验结果可为利用外源添加物提高血红素的饱和度,应用于染料脱色过氧化物酶的工业发酵提供理论依据.

关键词：大肠杆菌、脱色过氧化物酶、褐色嗜热裂孢菌、血红素饱和度

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资助基金：111引智计划111-2-06;国家轻工技术与工程一流学科自主课题LITE2018-27;江苏省现代工业发酵协同创新中心资助

在线出版日期：2019-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：23-30