海洋来源褐藻胶裂解酶及其基因B1SM的克隆和表达

摘要：

从海洋来源的假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)B1基因组中克隆1个褐藻胶裂解酶基因,并在大肠杆菌中实现异源表达,分离纯化重组酶并研究其酶学性质.通过Touch down PCR与热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)从假交替单胞菌B1基因组中扩增到1个褐藻胶裂解酶基因(B1SM),将目的基因插入到pGEX-4T-1载体,转化到宿主大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21 (DE3).结果显示,从菌株B1克隆得到褐藻胶裂解酶基因B1SM,序列长度为1 005 bp,编码334个氨基酸,理论等电点为8.51,编码蛋白质的理论分子质量为37.13 kDa.重组褐藻胶裂解酶B1SM的最适pH和温度分别为8.0和25℃.该褐藻胶裂解酶在pH 7.0 ～9.0范围内,25℃下保温1h,仍剩余60％以上活力,pH稳定性较好.在最适pH 8.0和30℃下保温1h重组酶仍剩余60％以上活力.该研究为褐藻胶裂解酶基因B1SM在E.coli BL21(DE3)中实现了异源表达,为褐藻胶裂解酶的制备和研究奠定基础.

关键词：褐藻胶裂解酶、假交替单胞菌、聚合酶链反应

所属期刊栏目：45

资助基金：福建省财政厅项目闽财指20151297号;福建省省财政厅项目闽财指20141262号;福州市市级科技计划项目2017X0035;校科技发展基金2014-XQ-20;校科技发展基金2013-XQ-28

在线出版日期：2019-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：77-82