黑曲霉酸性蛋白酶EXPA的克隆表达与酶学性质解析

摘要：

酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值.然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH ＞3.0时不稳定,限制了其应用范围.该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIM F0510的酸性蛋白酶基因expA在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115 (pPIC-expA).摇瓶发酵条件下,重组酶EX-PA的酶活为257 380 RFU/h.生物信息学分析的结果显示,该酶属于天冬氨酸蛋白酶A1A家族.酶学性质的研究表明,该重组酶的最适反应温度和pH分别为50℃和3.0;分别在40 ～50℃或pH 2.5～3.5孵育1h后,仍能保留80％左右的活力.Zn2+、Ca2+、Fe2+和M n2对其活性有一定的促进作用;而Cu2+、Co2+、Fe3+、EDTA和SDS则对其活性有显著的抑制作用.此外,重组酶EXPA对大豆分离蛋白、水溶性玉米蛋白和小麦水解蛋白均具有较好的水解作用.较好的耐热性和pH稳定性为EXPA在食品、饲料等领域的应用奠定了基础.

关键词：酸性蛋白酶、黑曲霉、分子克隆、酶学特征

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资助基金：天津市高等学校创新团队培养计划〈酶与生物催化关键技术〉TD12-5002;天津市国际交流与合作项目14RCGHSY00181

在线出版日期：2019-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：40-46