重组胶原酶Bacillus cereus ColM13的酶学及结构特性分析

摘要：

以前期成功构建出降解胶原蛋白的工程菌pET30a-ColM13/BL21为出发菌,对工程菌表达纯化出的重组胶原酶(ColM 13)的酶学性质进行分析.通过研究温度、pH、抑制剂对其的影响,得出ColM13的最适反应温度为50℃,最适反应pH为8.0;在20 ～55℃和pH6.0 ～9.0范围内有良好的稳定性;金属蛋白酶抑制剂乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸(ethylenebis(oxyethylenenitrilo tetraacetic acid,EGTA)对ColM13有显著的抑制作用.采用紫外光谱(ultraviolet and visible spectrum,UV)、差示量热扫描(differential scanning calorimeter,DSC)、荧光光谱(FS)、傅里叶红外光谱(FT-IR)对骨胶原蛋白及其酶解产物进行结构特性分析,分析可知酶解作用使骨胶原蛋白的三股螺旋结构遭到破坏,释放出大量的游离氨基酸.酶解后胶原蛋白的肽链上-NH2+-相互排斥减弱,疏水氨基酸残基作用增强,具有更高的热稳定性.与B.cereus MBL13-U分离纯化出的胶原酶(BSC)相比,ColM13处理的胶原蛋白的降解效果更明显.

关键词：工程菌pET30a-ColM13/BL21、重组胶原酶ColM13、胶原蛋白、酶学、结构特性

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资助基金：国家自然科学基金31401622、U1704114;河南省重大专项161100110900、161100110600-2、161100110700-2和161100110800-06;公益性行业农业科研专项201303084

在线出版日期：2018-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：16-21