乙醛脱氢酶的克隆表达及其酶学性质

摘要：

将GeneBank中人源乙醛脱氢酶2的基因序列根据酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的密码子偏好性进行密码子优化后合成目的基因ALDH2,采用融合PCR技术,构建人源ALDH2基因的表达组件TRP1L-URA3-TPIp-ALDH2-TPIt-TRP1R.通过电转化的方法将基因表达组件通过同源重组整合到酿酒酵母W303-1A的基因组上,获得基因工程菌W303-ALDH2.工程菌发酵后的粗酶液经His TrapTM excel亲和层析柱纯化获得重组AL-DH2,其活性为20.70 U/mg;重组酶的相对分子质量是56 kDa;最适反应pH和温度分别为5.0和35℃;除Na+外,K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+均能不同程度地提高ALDH2的酶活.以乙醛为底物测得酶的Km值为0.908 mmol/L,最大反应速度Vmax为114.94 U/mg;以辅酶NAD+为底物测得酶的Km值为0.282 mmol/L,最大反应速度Vax为58.82 U/mg.

关键词：人源乙醛脱氢酶2、酿酒酵母、克隆表达、酶学性质

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资助基金：啤酒用新酶创制与低碳制造关键技术研究,国家高技术发展863计划2013AA102109;基于酿酒酵母代谢工程改造降低黄酒中氨基甲酸乙酯含量的研究31701588;高等学校学科创新引智计划111计划资助项目111-2-06;江苏高校优势学科建设工程资助项目;江苏省现代工业发酵协同创新中心资助

在线出版日期：2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：22-28