嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶A的H297F定点突变、表达及酶学性质变化

摘要：

利用重叠延伸PCR技术对嗜热脂肪芽孢杆菌木聚糖酶XynA活性中心附近的H297位点突变为F.将XynA及XynA H297F在大肠杆菌BL21(DE3)中实施了表达、纯化以及酶学性质研究.比较研究野生型木聚糖酶XynA和突变体XynAH297P的酶学性质发现,突变前后木聚糖酶的最适反应pH值均为5.5,在pH 4 ～ 10的缓冲液中处理20 h后残余酶活均在90％以上,均具有较好的pH稳定性.XynA最适反应温度为70℃,80℃处理20min后只有10％的残余酶活;XynA H297最适反应温度为75℃,且相同处理条件下XynAH297仍具有30％左右的残余活性,说明突变体的热稳定性有一定程度提高.与XynA相比,XynAH297F的动力学参数Km、Vmax和Kcat均增大,说明突变后酶对底物的亲和力降低,但催化速率有所提高.

关键词：木聚糖酶、XynAH297F、定点突变、酶学性质

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资助基金：湖北省科技创新团队计划项目T201534;武汉设计工程学院校级科研项目K201303

在线出版日期：2018-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：41-46