Lys490饱和突变提高海藻糖合酶转化率的研究

摘要：

分析预测海藻糖合酶的空间结构,并进行分子对接和序列比对,选择Lys490位点进行定点饱和突变.利用全质粒PCR方法构建饱和突变体库,并利用高效液相色谱法筛选优势突变.经过筛选获得优势突变体K490L、K490I,对比分析表明,突变体K490L、K490I的转化率较原始酶分别提高了18％和15％.突变体酶学性质分析表明,K490L、K490I的最适反应温度及最适pH与原始酶保持一致,皆为25 C和pH 8.0,但两种突变酶的耐热性及耐酸性较原始酶有明显增强.在pH7.0环境下,突变体K490L、K490I放置60 min后,剩余酶活力均达80％以上,而原始酶低于68％.

关键词：海藻糖合酶、定点饱和突变、转化率、分子改造

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资助基金：国家自然科学基金31501413;山东省高等学校科技计划项目J14LE02;天津工业微生物重点实验室基金2016IM005;山东省重点研发计划017GSF221019

在线出版日期：2018-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：60-65