酿酒酵母孢子表面展示系统的构建及应用

摘要：

旨在建立1种酿酒酵母孢子表面展示系统,并将其应用于稀有糖合成.表面展示系统是运用微生物自身功能把外源蛋白或多肽展示在细胞表面,文中用磷酸甘油氧化酶(GPO)来验证酿酒酵母孢子表面展示系统的可行性.将编码肺炎链球菌来源的GPO的基因glpo与信号肽序列(ss)融合后连接到载体pRS42 4-TE Fpr上,将重组质粒pR S42 4-TEFpr-ss-glpo转化至酿酒酵母野生型及缺陷型菌株中并进行产孢,通过荧光观察、western blot分析以及酶活测定,表明酿酒酵母缺陷型孢子可以实现蛋白的表面展示.通过对GPO孢子表征,表明GPO孢子在pH为7.0、温度为30℃时活性最高,该孢子作为催化剂可以重复使用,当使用第3次时,活性可达最大活性的40％.最后将GPO孢子应用于“一锅四酶法”进行稀有糖L-果糖的合成,转化率为12％.

关键词：孢子表面展示、磷酸甘油氧化酶、酿酒酵母、稀有糖

所属期刊栏目：43

分类号：S43;R9

资助基金：国家自然科学基金21302069;中央高校基本科研业务费专项基金资助JUSRP1003;教育部科学技术研究重大项目313027

在线出版日期：2017-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14