干酪乳杆菌胞外多糖基因簇的调控基因在大肠杆菌中异源表达

摘要：

为研究干酪乳杆菌胞外多糖的生物合成和转录调控,对其生物合成基因簇中假定的转录调控因子LC2W_2170进行克隆,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中异源表达.首先,利用PCR技术从干酪乳杆菌LC2W中扩增出目的基因LC2W_2170,将其插入到大肠杆菌表达载体pET24a和pET30a中,构建出LC2W_ 2170 N端或C端和N端均含有His蛋白标签的重组质粒.含上述质粒的E.coli经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析并未发现LC2 W_2170蛋白可溶性表达.对LC2W_2170氨基酸序列利用Phobius服务器分析,发现该蛋白N端存在跨膜区(前27个氨基酸为跨膜序列).切除此跨膜区域重新构建重组表达质粒后,在E coli中成功实现LC2W_2170蛋白可溶性表达.研究为进一步纯化该转录调控因子,并研究其功能和对胞外多糖生物合成基因簇的转录调控机制奠定了基础.

关键词：干酪乳杆菌、胞外多糖、转录调控因子、异源表达、大肠杆菌

所属期刊栏目：43

分类号：R3 ;TQ9

资助基金：国家自然科学基金31371809;新世纪优秀人才计划NCET-13-0901;上海市曙光计划项目15SG42;中国科学院合成生物学重点实验室开放课题

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：7-12