金属离子协同氨基酸提高重组β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽孢杆菌中的表达

摘要：

随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点.为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circu-lans STB01的β-CGT酶基因插入质粒pST中,构建了分泌型表达载体cgt/ pST并在宿主B.subtilis WB600中成功表达;通过对摇瓶发酵产CGT酶的条件进行优化发现,当发酵培养基为TB,pH为7.0时,37℃培养48 h后胞外酶活力达到27.9 U/mL,与天然菌株B.circulans STB01在较优发酵条件下所分泌的胞外酶活力相比,提高了近19倍;对TB培养基碳源、氮源进一步优化,以6 g/L的玉米淀粉替代TB培养基中的甘油,以30 g/L的酵母提取物作为氮源,胞外酶活可达到31.2 U/mL;亮氨酸、天冬氨酸的添加能明显促进β-CGT酶的胞外表达,而0.5mmol/L Fe3+的添加能进一步将胞外酶活提高到36.9 U/mL.这是目前报道的β-CGT酶在B.subtilis中胞外表达的最高β-环化活力.

关键词：环糊精葡萄糖基转移酶、枯草芽孢杆菌、分泌表达、金属离子、氨基酸

所属期刊栏目：42

分类号：TS2;TQ9

资助基金：江苏省自然科学基金青年基金项目BK20150146;中国博士后科学基金面上项目2015M570406;江苏省“食品安全与质量控制协同创新中心”产业发展项目

在线出版日期：2016-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

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