基于保护剂筛选及优化策略提高苯丙氨酸羟化酶热稳定性

摘要：

苯丙氨酸羟化酶(Phenylalanine hydroxylase,PAH)具有治疗苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)的潜在药用价值,而热稳定性和储存稳定性差是限制其应用的重要因素.文中考察了多种保护剂对PAH热稳定性的影响,表明添加10％的甘油可将PAH在50℃处理10 min的酶活保留率提高3.1倍,达到(98.3±0.8)％,同时海藻耱、棉籽糖和甘露醇均能将PAH酶活保留率提高到78％以上.鉴于甘油在临床应用过程中可能出现不良反应,对后3种保护剂进行正交实验,获得最佳复合保护剂组合:2.5 mmol/L甘露醇、1 mmol/L棉籽耱和1.5 mmol/L海藻糖,可将50℃酶活保留率提高3.1倍,达到(99.3±1.2)％.10％甘油和复合保护剂均能显著提高PAH在4、20、37℃的储存稳定性,其中添加10％甘油或复合保护剂使得PAH在37℃下储存半衰期分别延长到129.9 h和237.5 h,比未添加保护剂的分别提高了1.9倍和4.3倍.该结果为PAH在医药领域的应用奠定了基础.

关键词：苯丙氨酸羟化酶(Phenylalanine hydroxylase、PAH)、保护剂、稳定性

所属期刊栏目：42

分类号：TM6;TS2

资助基金：国家863计划2014AA021304;2014年基本科研JUSRP51411B;江苏高校优势学科建设工程资助项目111-2-06

在线出版日期：2016-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：56-61