酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺重组大肠杆菌pepD/pepN基因的敲除及其发酵优化

摘要：

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,L-Ala-L-Gln),是目前国内外公认的L-谷氨酰胺载体,在临床医学和营养学等领域有广泛应用.为了减少丙谷二肽在生物酶法生产过程中菌体对其降解,利用λRed同源重组系统,敲除大肠杆菌中肽酶D和氨肽酶对应的编码基因.与野生型菌株相比,双敲除突变菌株的全细胞酶活提高了0.29倍.对该菌株进行摇瓶发酵优化,得到最优培养基为(g/L):葡萄糖12、酵母提取物10、胰蛋白胨10、(NH4)2SO4 1、KH2 PO4 3、K2 HPO4 1、MgSO4 0.2;最优发酵温度为27℃;最佳反应条件为:Gln 200 mmol/L、Ala-Ome·HCl 200 mmol/L,反应pH8.5,反应温度25℃.在最优条件下发酵36 h,丙谷二肽产量达到了14.51g/L反应液,是优化前的4.74倍.

关键词：L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、大肠杆菌、生物酶法、基因敲除、λRed同源重组、发酵优化

所属期刊栏目：42

分类号：TQ9;TS2

资助基金：国家自然科学基金30970058;国家自然科学基金21176106;工业生物技术教育部重点实验室江南大学开放课题基金KLIB-ZR200801

在线出版日期：2016-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：7-14