全细胞催化合成L-苯基乳酸重组大肠杆菌的构建

摘要：

苯基乳酸是一种新型天然广谱抑菌物质,L-乳酸脱氢酶是微生物转化苯丙酮酸合成L-苯基乳酸的关键酶,通过构建过量表达L-乳酸脱氢酶的重组大肠杆菌,提高大肠杆菌合成L-苯基乳酸(苯基乳酸,phenyllactic acid,PLA)的能力.以Bacillus megaterium Z2013513基因组为模板,经PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因,连接表达载体pET-28a(+)并导入到大肠杆菌BL21(DE3),获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-ldhL.SDS-PAGE电泳和酶活分析表明,约在40 ku处出现显著特异性条带,粗酶液酶活力达3.4 U/mg.在37℃、200 r/min条件下,25g/L(干重)重组大肠杆菌经60 min将70.32 mmol/L苯丙酮酸全细胞转化合成50.59 mmol/L L-苯基乳酸.由于具有较高的产物光学纯度(96.98％e.e.)和底物摩尔转化率(71.94％),表明一步生物转化法能高效地合成￡-苯基乳酸.

关键词：L-苯基乳酸、L-乳酸脱氢酶、巨大芽孢杆菌、重组大肠杆菌、全细胞转化

所属期刊栏目：41

分类号：R99;R97

资助基金：国家自然科学基金面上项目31470092;国家自然科学基金青年基金31501459;江苏省自然科学青年基金项目BK20130380;江苏省高校自然科学研究面上项目13KJB550002;江苏省“六大高峰人才”资助计划项目NY-021;苏州市科技支撑计划SNG201354;常熟市科技计划项目CN201412;科技部农业科技成果转化资金项目2013GB2C100176

在线出版日期：2016-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：13-17