启动子替代构建克雷伯氏菌普鲁兰酶高产菌株

摘要：

应用启动子替代技术将普鲁兰酶产生菌克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)HN9的普鲁兰酶基因的启动子替换为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的P43启动子,构建高产酶菌株.通过融合PCR,将由3个DNA片段融合得到启动子替代同源重组片段,该3个DNA片段分别是带有克雷伯氏菌普鲁兰酶基因启动子上游部分同源序列的四环素抗性基因(Tet)的上游片段Tet1、带有枯草芽孢杆菌P43启动子部分上游同源序列的Tet下游片段Tet2和带有克雷伯氏菌普鲁兰酶基因上游同源序列的P43启动子部分序列的Pro.经电转化将同源重组片段导入克雷伯氏菌中,转化子的普鲁兰酶基因表达水平比出发菌株提高10.23～ 11.45倍,摇瓶发酵酶活力提高8.97～10.52倍.结果表明,应用高效组成型启动子P43替代原始菌株的普鲁兰酶基因的启动子能够显著提高普鲁兰酶基因的表达量和发酵酶活力.

关键词：克雷伯氏菌、普鲁兰酶、启动子替代

所属期刊栏目：41

分类号：S51;TQ9

资助基金：“十二五”农村领域国家科技计划课题2013AA102101-2

在线出版日期：2015-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

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