生物质降解菌系中GH11家族耐热木聚糖酶基因的克隆与鉴定
以玉米芯粉为基质富集培养牛粪中生物质降解菌系,提取该降解菌系的宏基因组DNA,并以其为模板,通过简并引物PCR扩增出200bp左右的木聚糖酶基因片段,选择与耐热木聚糖酶相似性最高且丰度最高的基因序列,应用mTAIL-PCR扩增得到1 059bp的基因全长序列(xynHAD4),编码352个氨基酸,经序列比对分析,该木聚糖酶(XynHAD4)属于典型的GH11家族木聚糖酶,与来源于Dictyoglomus thermophilum的xylanase229B相似度为93％.将xynHAD4连接于表达载体pET22b(+),在E.coli BL21中成功得到表达,表达产物经纯化后,测定其分子质量约为36kDa,最适作用温度和pH分别为80℃和6.0,该酶在90℃保温1h,残余酶活为72％,pH作用范围较广,在pH4.0保存1h,残余酶活为82％,可见,XynHAD4属于耐热木聚糖酶,并且在酸性条件下可保持较高稳定性,在食品、饲料等领域具有潜在的应用价值.
生物质、宏基因组、mTAIL-PCR、耐热木聚糖酶、基因表达、酶学性质
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国家自然科学基金项目21176247,31101219;国家863计划2013AA102106;中国博士后科学基金面上项目2013M540076
2014-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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